测蛋白质含量方法步骤（蛋白质含量测定方法）
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ELISA结果发现最高点吸光值偏低或高的原因
1、毕竟是酶反应。还有 plate reader应该可以设置standard为“0”的吸光，以校正其他samples。另，低浓度的absorption接近是正常的。
2、结果见表1，整块板单波长检测的CV在3%以上，吸光度最高值和最低值的相对误差达17%以上。 在双波长测定中，减少了测定干扰和电路干扰，因此测定结果明显好转，结果见表1，整块板样本的CV在2%以下。
3、SDS)等酶抑制剂均可使反应终止。这类终止剂尚能使蓝色维持较长时间(12-24小时)不褪，是目视判断的良好终止剂。
如何准确测定样品中蛋白质的含量
1、一般情况，当溶液中的蛋白质浓度增加时，显色液在 595nm 处的吸光度基本能保持线性增加，因此可以用考马斯亮蓝 G-250 显色法来测定溶液中蛋白质的含量。
2、间接测定法：蛋白质与某些酸性或碱性色素分子结合形成不溶性的盐沉淀。用分光光度计测定未结合的色素，以每克样品结合色素的量来表示蛋白质含量的多少。
3、标准曲线的制备：使用标准品制备标准曲线，以确定待测样品中的蛋白质含量。标准曲线应该涵盖待测样品中预期的蛋白质含量范围，并且应该与待测样品同步准备。
4、碱性染料法 此法利用的是带苯环的氨基酸在碱性溶液中以偶氮染料显色，然后测定溶液中的吸光度，再与标准曲线对比，从而确定蛋白质的含量。双缩脲法 双缩脲法是一种用于测定蛋白质含量的经典方法。
5、测定蛋白质含量的方法有：凯氏定氮法、双缩脲法、酚试剂法、紫外吸收法、考马斯亮蓝法等。凯氏定氮法 凯氏定氮法是测定化合物或混合物中总氮量的一种方法。
蛋白质的测定方法
1、蛋白质含量测定的方法有微量凯氏定氮法、双缩脲法、folin―酚试剂法、考马斯亮兰法、紫外吸收法等。
2、蛋白质含量测定方法：紫外分光光度法蛋白质分子中存在含有共轭双键的酪氨酸和色氨酸，使蛋白质对280nm的光波具有最大吸收值，在一定的范围内，蛋白质溶液的吸光值与其浓度成正比，可作定量测定。
3、紫外吸收法可测定0.1-0.5mg/ml的蛋白质溶液，此操作简便，测定迅速，不消耗样品，低浓度盐类不干扰测定。因此，此法在蛋白质的制备中广泛应用。
4、双缩脲法是一个用于鉴定蛋白质的分析方法。双缩脲试剂是一个碱性的含铜试液，呈蓝色，由1%氢氧化钾、几滴1%硫酸铜和酒石酸钾钠配制。当底物中含有肽键时（多肽），试液中的铜与多肽配位，配合物呈紫色。
5、蛋白质测定的方法有凯氏定氮法、双缩脲法、酚试剂法、紫外吸收法等。凯氏定氮法。凯氏定氮法是测定化合物或混合物中总氮量的一种方法。
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