测定蛋白质含量的方法有哪些，测定蛋白质含量的方法及原理

大家好，今天小编关注到一个比较有意思的话题，就是关于测定蛋白质含量的方法有哪些的问题，于是小编就整理了4个相关介绍测定蛋白质含量的方法有哪些的解答，让我们一起看看吧。

双缩脲法测定蛋白质含量需注意哪些问题？

双缩脲法测定蛋白质含量的干扰因素有哪些：

双缩脲法测定蛋白质含量的干扰因素有三羟甲基氨基甲烷、一些氨基酸和EDTA。

双缩脲法是一个用于鉴定蛋白质的分析方法。双缩脲试剂是一个碱性的含铜试液，呈蓝色，由1%氢氧化钾、几滴1%硫酸铜和酒石酸钾钠配制。当底物中含有肽键时，试液中的铜与多肽配位，配合物呈紫色。可通过比色法分析浓度，在紫外可见光谱中的波长为540nm。鉴定反应的灵敏度为5~160mg/ml。

Folin-酚法测蛋白质的原理和操作？

Folin-酚法蛋白定量包括两步反应:第一步生成蛋白质一铜络合物; 第二步是酚基将磷钥酸、磷钨酸试剂还原. 试剂甲由A(4%碳酸钠溶液与0.2mol/L氢氧化钠溶液等体积混合)和B(1%硫酸铜溶液与2%的酒石酸钾钠溶液等体积混合)两种溶液组成.你说的加了甲后10min再加乙,因为第一步反应肯定要时间的,试剂甲当然不能省了,其他的不说,它最起码提供了碱性的反应条件,Folin-酚法测定蛋白酶活力的原理是蛋白酶水解酪蛋白产生Tyr, 在碱性条件下，Tyr与Folin试剂反应生产蓝色物质，于680nm比色测定光吸收值，计算酶活力。

要绘制 Tyr标准曲线,这两个共同的步骤是第二步显色反应.

荧光现象怎么检测和收集？

现在也可以用单光子雪崩二极管（SPAD）去做传感器。

然后通过时间相关单光子计数（TCSPC）来成像。这种方法可以去测量荧光强度的同时更重要的是可以去检测荧光的寿命也就是荧光寿命成像（FLMI）。荧光团受激发后会以指数衰减的方式发射出荧光。从最强点衰减到将近37%（好像是1/e）光强需要的时间就是他的荧光寿命，这个荧光寿命可以用来检测细胞或者蛋白质的内环境 像ph值，离子浓度啊之类的。SPAD可以做到很小并做成阵列。这样的话就不一定像PMT那样扫描了，厉害的话可以做成实时成像。现在荷兰那边和爱丁堡那边应该有做到512x512水平的SPAD阵列芯片。

现在也可以用单光子雪崩二极管（SPAD）去做传感器。

然后通过时间相关单光子计数（TCSPC）来成像。这种方法可以去测量荧光强度的同时更重要的是可以去检测荧光的寿命也就是荧光寿命成像（FLMI）。荧光团受激发后会以指数衰减的方式发射出荧光。从最强点衰减到将近37%（好像是1/e）光强需要的时间就是他的荧光寿命，这个荧光寿命可以用来检测细胞或者蛋白质的内环境 像ph值，离子浓度啊之类的。SPAD可以做到很小并做成阵列。这样的话就不一定像PMT那样扫描了，厉害的话可以做成实时成像。现在荷兰那边和爱丁堡那边应该有做到512x512水平的SPAD阵列芯片。

为什么光的吸收值与蛋白质的浓度成正比？

原理：蛋白质分子中常含有酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸等苯环结构，在紫外280nm波长处有最大吸收峰，其光吸收值与蛋白质浓度成正比，故可以用280nm波长吸收值大小来测定蛋白质含量。 优点：

1. 快速2. 对蛋白质无破坏性 缺点：1. 不是严格的定量方法。因为此法是根据酪氨酸（Tyr）、苯丙氨酸（Phe）、色氨酸（Trp）残基的强吸收值来测定的，不同的蛋白质具有不同的消光系数。 另外，当蛋白质分子中不含Tyr、Phe或Trp残基时，该方法就不能检出蛋白。（此法用于测粗提总蛋白浓度较为适宜）

2. 核酸可引起强烈干扰

到此，以上就是小编对于测定蛋白质含量的方法有哪些的问题就介绍到这了，希望介绍关于测定蛋白质含量的方法有哪些的4点解答对大家有用。