蛋白质测序方法，蛋白质测序方法有哪几种

大家好，今天小编关注到一个比较有意思的话题，就是关于蛋白质测序方法的问题，于是小编就整理了4个相关介绍蛋白质测序方法的解答，让我们一起看看吧。

蛋白质工程的核心流程和操作对象？

1.蛋白质工程的核心流程：预期蛋白质功能--设计预期的蛋白质--推测应有的氨基酸序列--找到对应的脱氧核苷酸序列

2.蛋白质工程的操作对象：基因

3.蛋白质工程是对现有蛋白质的改造或制造新的蛋白质，需要通过基因的修饰或基因的合成。

蛋白质工程的基本流程简述如下：筛选纯化需要改造的目的蛋白，研究其特性常数等；制备结晶，并通过氨基酸测序、X射线晶体衍射分析、核磁共振分析等研究，获得蛋白质结构与功能相关的数据；结合生物信息学的方法对蛋白质的改造进行分析；由氨基酸序列及其化学结构预测蛋白质的空间结构，确定蛋白质结构与功能的关系，进而从中找出可以修饰的位点和可能的途径；根据氨基酸序列设计核酸引物或探针，并从cDNA文库中获取编码该蛋白的基因序列；在基因改造方案设计的基础上，对编码蛋白质的基因序列进行改造，并在不同的表达系统中表达；分离纯化表达产物，并对表达产物的结构和功能进行检测等。

要知道目的基因是否表达,在分子水平上检测和个体水平上检测都是如何进行的？

在分子水平上检测目的基因是否表达通常包括以下步骤：

核酸水平检测：通过分子杂交等技术检测目的基因的转录本，以确定目的基因是否正在被转录成mRNA。

蛋白质水平检测：通过蛋白质印迹法、免疫沉淀法等技术检测目的基因的翻译产物，以确定目的基因是否正在被翻译成蛋白质。

生物活性检测：检测目的基因编码的蛋白质是否具有生物活性，以确定目的基因是否能够正常表达并发挥其功能。

在个体水平上检测目的基因是否表达通常包括以下步骤：

表型水平检测：检测个体是否表现出目的基因所控制的性状，以确定目的基因是否正常表达并发挥其功能。

组织水平检测：检测不同组织中目的基因的表达水平，以确定目的基因是否在不同组织中正常表达。

细胞水平检测：检测单个细胞中目的基因的表达水平，以确定目的基因是否在细胞内正常表达。

基因组和蛋白质组的区别？

基因组：以生物体所有的核酸为研究对象，狭义的基因组定义为生命体的全套DNA，广义的基因组则包含DNA、mRNA、lncRNA等参与到基因表达调控的所有核酸序列。其主要研究手段为基因测序，以华大基因为代表。转录组通常可认为是基因组的简化研究手段，即所有转录本的集合。

蛋白组：生物体基因组所编码的全套蛋白质。鉴于蛋白质表达的时空特异性，各组织器官或者特定亚细胞结构器（如线粒体、叶绿体），甚至是外泌蛋白，也可以成为一个蛋白组。所以蛋白质组是信号转导、分子发育最为直接的手段。其主要研究手段为生物质谱，在国内以牟合蛋白为典型。

分子生物学鉴定步骤？

首先你要提出细菌的DNA。方法如下：

1、液体培养及保种：从斜面上挑取菌苔于液体培养基中放摇床上震荡（转速160r/min）培养16小时。吸取菌液于1.5ml的经过灭菌的EP管中，再加甘油（30-40%）进行保种。（-80摄氏度保藏2年）

2、提取DNA（CTAB法）： （1）取1.5ml菌液于1. 5ml离心管中，12000r/min离心2min，弃上清。 （2）向沉淀物中加入350ul双蒸水，重新悬浮沉淀。

（3）加入20ul10%SDS和3ul的蛋白酶K（20mg/ml），溶菌酶3ul，混匀，于50℃温育1h。

（4）加入50ul 5mol/L NaCl溶液，充分混匀，再加入50ul CTAB/NaCl溶液，混合后再65℃温育30min。

（5）冷却后加入等体积的酚(沉淀蛋白质)：氯仿：异戊醇（增强酚的作用）（25:24:1），小心上下颠倒混匀，12000r/min离心5min，将上清液转移到新的EP管，重复此步骤2-3次，直至分层界面无白色沉淀。

（6）加入等体积的氯仿：异戊醇（24:1），小心颠倒混匀，12000r/min离心5min将上清液转移到新的EP管。（纯化作用）

（7）加入0.6倍体积的异丙醇，轻轻混合直到DNA沉淀下来，12000r/min离心15min弃上清。

（8）向离心管中加入75%乙醇，12000r/min离心5min洗涤DNA沉淀，小心弃上清，重复洗涤1次，弃上清将离心管倒置于吸水纸上，晾干。

（9）加入50ul（双蒸水）/ TE Buffer溶解DNA于4℃保存。

（10）电泳检测6、PCR扩增：（细菌的通用引物为27F和1492R）将提取得到的DNA进行PCR扩增，电泳检测扩增得到的16S rDNA（如果菌类分明，条带清晰，PCR原液可直接送去测序，双向测通，得到测序序列后到NCBI的BLAST页面比对，得出鉴定结果）。

到此，以上就是小编对于蛋白质测序方法的问题就介绍到这了，希望介绍关于蛋白质测序方法的4点解答对大家有用。