有机溶剂沉淀蛋白质,有机溶剂沉淀蛋白质原理
大家好,今天小编关注到一个比较有意思的话题,就是关于有机溶剂沉淀蛋白质的问题,于是小编就整理了5个相关介绍有机溶剂沉淀蛋白质的解答,让我们一起看看吧。
蛋白质的沉淀的原理是?
蛋白质通过盐析的办法沉淀的原理是降低蛋白质的溶解度,使蛋白质凝聚而从溶液中析出。
硫酸铵沉淀的蛋白用什么溶解
除了透析除盐外,还有什么方式可以除去硫酸铵采用有机溶剂沉淀溶液中的硫酸铵这种方法,比较少见,主要是因为有机溶剂容易是蛋白质变性。如果想去除溶液中的硫酸铵,方法较多。但是如果去除蛋白质溶液中的硫酸铵,一般采用透析去除溶液中的硫酸铵,或者采用超滤去除硫酸铵。
(1)透析去除硫酸铵需要的时间比较长,还需要尽量在低温下操作,然后用蔗糖或者聚乙二醇浓缩脱水;
(2)采用超滤除盐比较方便,操作简单,采用截留分子量为10000的超滤膜就可以
常用蛋白质沉淀方法有哪些?有哪些应用实例?求答案?
一般最常见的是盐析沉淀,就是在蛋白质溶液中加入一定量的硫酸铵,蛋白质便会沉淀下来,不同蛋白沉淀所需要的硫酸铵浓度不一样,通过这个方法也可以对蛋白进行初步的纯化分离。
再有就是等电沉淀,通过调节蛋白溶液的pH,使其刚好达到目标蛋白的等电点,这时候蛋白分子将不带有电荷,在相互碰撞聚集过程中沉淀下来。
与之类似的有通过加沉淀剂或絮凝剂比如明矾之类的,也可以沉淀蛋白。
另外还有就是亲和沉淀,利用生物分子亲和力,比如抗原抗体亲和、酶与底物亲和等性质,将配对的另一半固定在某些介质,比如小磁珠上,就能将溶液里面的目的蛋白抓住沉淀下来。
乙醇沉淀蛋白质有哪些注意事项?
这就是五变参数:蛋白质含量,离子强度,溶液pH值,乙醇浓度,溶液温度。
1。蛋白质含量,愈高,共沉多;反之,分离愈彻底。当然有度。溶液太稀了,成本高。
2。离子强度:这与介电强度有关。
3。溶液pH值:调到目标蛋白等电点周围。
4。乙醇浓度:一般来说乙醇浓度多少,与目标蛋白的分子量有关:比如8%,可沉淀纤维蛋白原,20%可沉淀球蛋白,40%可沉淀白蛋白等等,当然,乙醇浓度与溶液pH值配合使用。加入乙醇不能过快,防止局部过浓。要边加边摇动。 否则,共沉多!或者局部变性。
5。溶液温度:必须低温,乙醇反应是个放热反应,如果温度高,可引起蛋白质变性,不可逆的变形。这五变参数,要综合,动态的调整,可达到精确分离蛋白质的作用。
沉淀的蛋白质是不是一定会变性,并举例说明?
沉淀可以是由蛋白质变性从而产生沉淀,也可以是由于盐析。
蛋白质变性是指光照,热,有机溶济以及一些变性剂(如重金属盐)的作用时蛋白质的空间结构被破坏,使得蛋白质丧失活性,该过程不可逆。
盐析是指向蛋白质的溶液中加入轻金属盐,使得蛋白质沉淀析出,这是由于加入盐降低了蛋白质得溶解度而析出,该过程可逆,加水蛋白质又会溶解。
二者本质上是不同的
到此,以上就是小编对于有机溶剂沉淀蛋白质的问题就介绍到这了,希望介绍关于有机溶剂沉淀蛋白质的5点解答对大家有用。