磷钨酸蛋白质染色（磷钨酸染液配制）

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本文目录一览：

• 1、lowry法测蛋白质原理
• 2、蛋白质及氨基酸的显色反应
• 3、蛋白质的颜色反应的机理
• 4、folin酚法测定蛋白质的原理是什么?

lowry法测蛋白质原理

lowry法测蛋白质原理如下：实验原理：磷钼酸和磷钨酸在碱性条件下易被酚类化合物还原而呈蓝色反应。因蛋白质中含有代酚基的酪氨酸，故有此反应。

实验原理：磷钼酸和磷钨酸在碱性条件下易被酚类化合物还原而呈蓝色反应。

福林酚法，也称为Lowry法，是一种在生物学和生物化学中经常使用的蛋白质定量方法。 原理 福林酚法测定蛋白质含量的原理主要基于蛋白质的肽键与碱性溶液（如碳酸钠）反应形成碱性氨基酸，然后加入福林酚试剂。

lowry法测蛋白原理原理是蛋白质溶液用碱性铜溶液处理后，碱性铜试剂与蛋白质中的肽键作用产生双缩脲反应，形成铜—蛋白质的络合盐。

检测原理：Lowry法是双缩脲法与福林酚法的结合与发展。

蛋白质及氨基酸的显色反应

是茚三酮颜色反应。除脯氨酸和羟脯氨酸与茚三酮作用生成黄色物质外，所有α-氨基酸与茚三酮发生反应生成紫红色物质，最终形成蓝紫色化合物。1︰1500000浓度的氨基酸水溶液即能发生反应而显色。

常用的显色反应 双缩脲反应：该反应是肽键常用的反应，即在碱性铜溶液中，肽键与铜离子形成络合物，呈紫色(在540nm有最大 光吸收峰)。

蛋白质和多肽分子中肽键在稀碱溶液中与硫酸铜共热，呈现紫色或红色，此反应称为双缩脲反应，双缩脲反应可用来检测蛋白质水解程度。 茚三酮反应(ninhydrin reaction)。蛋白质经水解后产生的氨基酸也可发生茚三酮反应。

第二步是所生成之还原型茚三酮与另一个水合茚三酮分子和氨缩合生成有色物质。此反应的适宜pH为5～7，同一浓度的蛋白质或氨基酸在不同pH条件下的颜色深浅不同，酸度过大时甚至不显色。

反应变色 含有芳香族氨基酸特别是酪氨酸和色氨酸的蛋白质在溶液中遇到硝酸后，先产生白色沉淀，加热则变黄，再加碱颜色还会加深，变为橙黄色。

蛋白质的颜色反应的机理

原理：苯丙氨酸和酪氨酸含有苯环，苯环与硝酸作用产生黄色物质。而这两种氨基酸是基本氨基酸，是构成蛋白质的常见氨基酸，所以蛋白质也会有黄色反应。

反应原理是硝酸对苯环发生硝化作用，生成黄色的芳香硝基化合物，使蛋白质发生变性。浓硝酸滴到皮肤上，过一段时间皮肤就会发黄，数天后死皮褪去，就是因为这个原因。生成的黄色冷却后，若再与碱或氨水接触，则颜色转变为橙黄色。

茚三酮反应：蛋白质或氨基酸的游离氨基与茚三酮在弱酸条件下发生反应，生成蓝紫色化合物，但脯氨酸与茚三酮反应则是生成黄色化合物。黄色反应：含有苯环的蛋白质可以与浓硝酸发生显色反应，生成黄色化合物。

蛋白质分子与双缩脲试剂能够产生紫色的颜色反应，是因为蛋白质分子中含有肽键。双缩脲试剂本是用来检测双缩脲，由于蛋白质分子中含有很多与双缩脲结构相似的肽键，因此也能与铜离子在碱性溶液中发生双缩脲反应。

folin酚法测定蛋白质的原理是什么?

此法的显色原理与双缩脲方法是相同的，只是加入了第二种试剂，即Folin—酚试剂，以增加显色量，从而提高了检测蛋白质的灵敏度。这两种显色反应产生深蓝色的原因是：在碱性条件下，蛋白质中的肽键与铜结合生成复合物。

原理：FOLIN-酚试剂可以和游离的酪蛋白螯合，呈蓝色，可以通过OT检测，判断溶液中的游离酪蛋白含量。注意：注意OT测量对比空白样品中的蛋白含量。

Folin法的原理 (1)在碱性条件下，蛋白质与铜作用生成蛋白质—铜络合物。(2)此络合物将试剂磷钼酸—磷钨酸(Folin试剂)还原，混合物呈深蓝色(磷钼蓝和磷钨蓝混合物)，颜色深浅与蛋白质含量成正比。

原理 福林酚法测定蛋白质含量的原理主要基于蛋白质的肽键与碱性溶液（如碳酸钠）反应形成碱性氨基酸，然后加入福林酚试剂。

此法的显色原理与双缩脲方法是相同的，只是加入了第二种试剂，即Folin—酚试剂，以增加显色量，从而提高了检测蛋白质的灵敏度。

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