考马斯亮蓝法测蛋白质含量，考马斯亮蓝法测蛋白质含量实验报告

大家好，今天小编关注到一个比较有意思的话题，就是关于考马斯亮蓝法测蛋白质含量的问题，于是小编就整理了4个相关介绍考马斯亮蓝法测蛋白质含量的解答，让我们一起看看吧。

考马斯亮蓝反应现象？

考马斯亮蓝法测定蛋白质含量实验中，使用的水最低要求是蒸馏水，更高精度要求可能会使用双蒸水。因为Bradford检测中要用的试剂配制，标准曲线的制作都要用到水。

如果不是使用蒸馏水，可能水里面会有一些游离的离子或者电解质，会影响试剂配制的准确性，干扰实验结果。

而水中残留的有机物等可能会和考马斯亮蓝发生变色反应，这样制作的标准曲线会比实际值偏高，导致最终浓度检测的结果比实际结果偏低。

考马斯亮蓝G250法测蛋白质含量比其他方法有什么优点？

　　考马斯亮蓝G250法测蛋白质含量比其他方法的优点是：　　

1.蛋白质与考马斯亮蓝G-250结合在2min左右的时间内达到平衡，完成反应十分迅速；　　

2.其结合物在室温下1h内保持稳定。　　

3.该法试剂配制简单，操作简便快捷，反应非常灵敏，灵敏度比Lowry法还高4倍，可测定微克级蛋白质含量，测定蛋白质浓度范围为0～1,000μg/mL，是一种常用的微量蛋白质快速测定方法。　　考马斯亮蓝G-250测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。考马斯亮蓝G-250在游离状态下呈红色，最大光吸收在488nm；当它与蛋白质结合后变为青色，蛋白质-色素结合物在595nm波长下有最大光吸收。其光吸收值与蛋白质含量成正比，因此可用于蛋白质的定量测定。

考马斯亮蓝法测蛋白质含量用到哪些仪器？

蛋白质的存在影响酸碱滴定中所用某些指示剂的颜色变化，从而改变这些染料的光吸收。

在些基础上发展了蛋白质染色测定方法。涉及的指示剂有甲基橙、考马斯亮蓝、溴甲酚绿和溴甲酚紫。目前广泛使用的染料是考马斯亮蓝。考马斯亮蓝G-250在酸性溶液中为棕红色，当它与蛋白质通过范德华键结合后，变为蓝色，且在蛋白质一定浓度范围内符合比尔定律，可在595nm处比色测定。2—5分钟即呈最大光吸收，至少稳定1小时。在0.01—1.0 mg蛋白质/ml范围内均可。该法操作简便迅速，消耗样品量少，但不同蛋白质之间差异大，且标准曲线线性差。高浓度的Tris、EDTA、尿素、甘油、蔗糖、丙酮、硫酸铵和去污剂时测定有干扰。缓冲液浓度过高时，改变测定液pH值会影响显色。考马斯亮蓝染色能力强，比色杯不洗干净会影响光吸收值，不可用石英怀测定

考马斯亮蓝G250法测定蛋白质含量时，如何避免测定中出现误差，避免样品的OD值低于空白对照的情况发生？

考马斯亮蓝测定蛋白质浓度是较常用的方法，误差可尽量减到最小，需注意：测定OD值前，将分光光度计提前预热至少30分钟，可保证准确性；配制好的考马斯亮蓝溶液应放于4度保存备用；盐离子不会影响实验结果，但去污剂，如TRITONX-100，SDS等，会严重干扰实验结果。

到此，以上就是小编对于考马斯亮蓝法测蛋白质含量的问题就介绍到这了，希望介绍关于考马斯亮蓝法测蛋白质含量的4点解答对大家有用。