蛋白质分离纯化方法，

大家好，今天小编关注到一个比较有意思的话题，就是关于蛋白质分离纯化方法的问题，于是小编就整理了3个相关介绍蛋白质分离纯化方法的解答，让我们一起看看吧。

蛋白分离的方法和原理？

蛋白质分离的方法和原理如下：

电泳法：利用蛋白质在电场中电泳迁移率的不同而进行分离的技术。

层析法：利用不同的物理化学性质将蛋白质分离的方法，常见的层析方法包括凝胶过滤层析、离子交换层析、凝胶渗透层析等。

亲和纯化法：利用蛋白质与特定配体之间的特异性结合进行分离的方法。

沉淀法：

盐析法：利用高浓度盐的正离子与蛋白质分子表面的负电荷中和，使蛋白质颗粒容易碰撞而形成沉淀。

等电点沉淀法：利用蛋白质在等电点时溶解度最小，容易沉淀的原理。

有机溶剂沉淀法：利用有机溶剂使溶液的介电常数减少，增加相反电荷基团之间的吸引力，使蛋白质分子聚集和沉淀。

蛋白质分离方法包括电泳、凝胶过滤、亲和层析和离子交换层析等。

电泳是将蛋白质分离到电场中的一种方法，分为聚丙烯酰胺凝胶电泳、SDS-PAGE和二维电泳等；凝胶过滤是通过分子量来分离蛋白质，分为薄层过滤和凝胶层析；亲和层析是利用某些物质与目标蛋白质的亲和性分离，如免疫层析和金属柱层析；离子交换层析是利用目标蛋白质与离子交换树脂的作用不同来分离。这些分离方法的原理是利用不同的分离机制对蛋白质进行纯化和分离。

蛋白纯化原理及步骤？

蛋白纯化要利用不同蛋白间内在的相似性与差异，利用各种蛋白间的相似性来除去非蛋白物质的污染，而利用各蛋白质的差异将目的蛋白从其他蛋白中纯化出来。每种蛋白间的大小、形状、电荷、疏水性、溶解度和生物学活性都会有差异，利用这些差异可将蛋白从混合物如大肠杆菌裂解物中提取出来得到重组蛋白。

蛋白的纯化大致分为粗分离阶段和精细纯化阶段二个阶段。一般蛋白纯化采用的方法为树脂法。粗分离阶段主要将目的蛋白和其他细胞成分如DNA、RNA等分开，由于此时样本体积大、成分杂，要求所用的树脂高容量、高流速、颗粒大、粒径分布宽．并可以迅速将蛋白与污染物分开，必要时可加入相应的保护剂（例如蛋白酶抑制剂），防止目的蛋白被降解。

蛋白质分离纯化常用方法有：

1、电泳：

原理：蛋白质在高于或低于其等电点的溶液中是带电的，在电场中能向电场的正极或负极移动。

步骤：根据支撑物不同，有薄膜电泳、凝胶电泳等。

2、层析： 

a原理：离子交换层析，利用蛋白质的两性游离性质，在某一特定PH时，各蛋白质的电荷量及性质不同，故可以通过离子交换层析得以分离。如阴离子交换层析，含负电量小的蛋白质首先被洗脱下来

 步骤：分子筛，又称凝胶过滤。小分子蛋白质进入孔内，滞留时间长，大分子蛋白质不能时入孔内而径直流出。

蛋白质变性的四种方法？

强酸强碱重金属盐和尿素

在热、酸、碱、重金属盐、紫外线等作作用下，蛋白质会发生性质上的改变而凝结起来。这种凝结是不可逆的，不能再使它们恢复成原来的蛋白质。蛋白质的这种变化叫做变性，蛋白质变性之后，紫外吸收，化学活性以及粘度都会上升，变得容易水解，但溶解度会下降。

蛋白质变性后，就失去了原有的可溶性，也就失去了它们生理上的作用，因此蛋白质的变性凝固是个不可逆过程。

少量的盐（如硫酸铵、硫酸钠等）能促进蛋白质的溶解。如果向蛋白质水溶液中加入浓的无机盐溶液，可使蛋白质的溶解度降低，而从溶液中析出，这种作用叫做盐析。

这样盐析出的蛋白质仍旧可以溶解在水中，而不影响原来蛋白质的性质，因此盐析是个可逆过程。利用这个性质，采用分段盐析方法可以分离提纯蛋白质。

到此，以上就是小编对于蛋白质分离纯化方法的问题就介绍到这了，希望介绍关于蛋白质分离纯化方法的3点解答对大家有用。