双缩脲法测定蛋白质含量，双缩脲法测定蛋白质含量的优缺点

大家好，今天小编关注到一个比较有意思的话题，就是关于双缩脲法测定蛋白质含量的问题，于是小编就整理了5个相关介绍双缩脲法测定蛋白质含量的解答，让我们一起看看吧。

为什么双缩脲试剂可以定量测定蛋白质的含量？

双缩脲试剂中没有蛋白质，所以蛋白质的含量浓度为0.双缩脲试剂A是氢氧化钠的质量分数为0.1g/mL的水溶液；双缩脲试剂B硫酸铜的质量分数为0.01g/mL的水溶液.先将双缩脲试剂A3mL加入组织样液3mL，振荡均匀（必须营造碱性环境），再加入2~3滴双缩脲试剂B，振荡均匀。如果组织里含有蛋白质，那么会看到溶液变成紫色。具有两个或两个以上肽键的化合物皆可与双缩脲试剂产生紫色反应。蛋白质的肽键在碱性溶液中能与Cu2+络合成紫红色的络合物。颜色深浅与蛋白质浓度成正比。双缩脲法测定蛋白质测定范围能够是1~10mg蛋白质，操作简单、快捷。

双缩脲检验蛋白质原理，实验现象是什么？

双缩脲试剂检测蛋白质原理是双缩脲在碱性溶液中能与硫酸铜反应产生红紫色络合物，此反应称为双缩脲反应。蛋白质分子中含有很多和双缩脲结构相似的肽键，因此也能起双缩脲反应，形成红紫色络合物。

双缩脲试剂本是用来检测双缩脲，由于蛋白质分子中含有很多与双缩脲结构相似的肽键，因此也能与铜离子在碱性溶液中发生双缩脲反应。当底物中含有肽键时，试液中的铜与多肽配位，络合物呈紫色。可通过比色法分析浓度。

双缩脲法测定蛋白质的优缺点：

优点：双缩脲法测定蛋白质的测定范围是1~10mg蛋白质，操作简单、快捷。既适合手工操作，又适合自动化分析，重复性好、线性关系好，双缩脲试剂可以长期保存。

缺点：灵敏度差，测定范围窄，样品需要量大，不同的蛋白质产生颜色的深浅相近，因此它常用于需要快速，但并不需要十分精确的蛋白质测定。

干扰测定的物质包括有：在性质上是氨基酸或肽的缓冲液，如TrIs缓冲液，因为它们产生阳性呈色反应，铜离子也容易被还原，有时出现红色沉淀。

为什么不能用双缩脲的方法测定植物块茎的蛋白质含量？

双缩脲法灵敏度较低1~20mg，实验时间20~30min，干扰物质有硫酸铵，TRIS，部分氨基酸。主要用于快速测定，但是不太灵敏，不同的蛋白质显色相似。可以试试Lowry法

用双缩脲试剂检测蛋白质时。不能加入双双缩脲混合试剂？

不能。 双缩脲试剂的A液与B液混合后就发生反应了，而双缩脲试剂的原理是利用氢氧化钠的造成碱性环境，然后再加入硫酸铜溶液，使其中的铜离子与蛋白质在碱性环境下生成紫色的络合物。

为什么在蛋白质的检测中，双缩脲试剂B只有4滴而不能过量？

双缩脲试剂分为A液与B液。A为氢氧化钠，B为硫酸铜。双缩脲试剂与蛋白质反应的实质其实是与肽键反应。而肽键实际上是断开后与铜离子形成紫色复合物。该反应需在碱性环境下完成。但硫酸铜遇到大量碱会生成氢氧化铜沉淀。故仅仅滴加3~4滴硫酸铜溶液，以免蓝色的氢氧化铜盖住了紫色复合物的紫色导致观察失败。

到此，以上就是小编对于双缩脲法测定蛋白质含量的问题就介绍到这了，希望介绍关于双缩脲法测定蛋白质含量的5点解答对大家有用。