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蛋白质疏水层析（蛋白质疏水层析原理）

发布时间：2024-04-04 12:57:03 蛋白质 0次作者：健康资讯网

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对于一种高度疏水性的蛋白，在反相层析中可能需要更高的有机溶剂浓度才能洗脱，所以出峰时间较晚；而在疏水层析中，由于其与固定相的疏水相互作用更强，可能在较高的盐浓度就被洗脱，所以出峰时间较早。

蛋白质疏水层析（蛋白质疏水层析原理）

一种是疏水性太强，这样的蛋白质有非常强的疏水相互作用，往往容易导致结合上疏水层析后难以被洗脱下来。需要极其剧烈的洗脱条件，可是剧烈的条件由容易造成蛋白变性。所以不适合采用疏水层析。

一般来说，疏水纯化蛋白，高盐上柱，逐渐降低盐浓度洗脱，这样就可以分离疏水性不同的蛋白了。疏水层析也称疏水作用下层析从分离纯化生命物质的机制来看，也属于吸附层析一类。

反相色谱的应用特点：反相介质性能稳定。分离效率高，它能分离蛋白质、肽、氨基酸、核酸、甾体、脂类、脂肪酸、碳水化合物、生物碱等含有非极性基团的物质。

色谱分析具有很多优点：分离效果好，设备简单，操作方便，条件较温和，方法多样，能适应不同的需要。其缺点主要是：处理量小，周期长，不能连续操作；有的层析介质价格昂贵，有时找不到合适的介质。

对于抗生素类的小分子物质，其传统的生产过程，要经过过滤、萃取、浓缩、结晶等工艺，存在过程冗长、收率低、能耗大等缺点，而且在精制过程中有微量大分子杂质残留，如蛋白质、核酸、多醣等，这些杂质可能对人体产生副作用。

疏水层析目的蛋白结合太紧，一般需要降低疏水作用，可以考虑降低结合时中性盐的浓度。使用疏水力较弱的层析填料，比如丁基疏水、辛基疏水的填料。

疏水吸附层析属于反向层析，因而高盐溶液上柱，让蛋白质样品暴露更多的疏水残基便于与疏水性固定相相互作用，按低盐。水和有机溶剂顺序洗脱降低要分离样品的极性，使其被洗脱下来。低盐洗脱。有机溶剂洗脱。

纯水状态下，任何疏水作用都太弱而不能导致配基与蛋白之间的相互作用。某些盐却可以增强疏水相互作用。高浓度的盐会增强相互作用，而低浓度的盐会降低相互作用。但是目前尚无被广泛接受的关于疏水相互作用层析机制的理论。

1、原理：利用物质的电荷和层析载体的电荷间的相互作用，进而达到分流动相离纯化的目的。离子交换层析平衡离子是结合于配基上的相反离子，它能与溶液中其它的离子基团发生可逆的交换反应。如Na+和Cl-。

2、层析：利用蛋白质在固定相与流动相之间不同的分配比例，达到分离目的的技术。

3、透析：原理：利用蛋白质分子不能透过半透膜的性质，使蛋白质和其他小分子物质如无机盐、单糖、水等分开。

在生物合成药物中主要用于大分子物质的分级分离和脱盐浓缩，小分子物质的纯化，医药生化制剂的去热原处理等。 1除热原制剂中去除热原一般是利用活性碳反复吸附，该方法劳动强度大、损耗大、得率低。

蛋白质的盐析法：中性盐对蛋白质的溶解度有显著影响，一般在低盐浓度下随着盐浓度升高，蛋白质的溶解度增加，此称盐溶；当盐浓度继续升高时，蛋白质的溶解度不同程度下降并先后析出，这种现象称盐析。

在体分析常规的有胰岛素的小鼠血糖法等，另外还有根据各类蛋白多肽的生物活性不同而建立的各异的方法，如根据IL-8可将大量中性粒细胞从骨中动员出的性质[1] 而建立的IL-8动员中性粒细胞家兔体内实验。

进一步纯化，一般使用层析法包括凝胶过滤、离子交换层析、吸附层析以及亲和层析等。必要时还可选择电泳法，包括区带电泳、等电点聚焦等作为最后的纯化步骤。用于细分级分离的方法一般规模较小，但分辨率很高。

1、疏水层析的缺点是蛋白质在高盐中溶解度降低。

2、我觉得最有可能是样品被稀释过多倍数造成的。建议换小体积的柱子或增大样品量。

3、由于这两种层析技术的工作原理不同，所以疏水性差异的两种蛋白在反相层析和疏水层析上的出峰位置可能是相反的。

4、不同的分子由于疏水性不同，它们与疏水性层析介质之间的疏水性作用力强弱不同，疏水作用层析就是依据这一原理分离纯化蛋白质和多肽等生物大分子的。

5、有机溶剂能降低蛋白质溶解度的原因有二：其与盐溶液一样具有脱水作用；其有机溶剂的介电常数比水小，导致溶剂的极性减小。

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