蛋白质的测定方法，蛋白质的测定方法有哪些

大家好，今天小编关注到一个比较有意思的话题，就是关于蛋白质的测定方法的问题，于是小编就整理了3个相关介绍蛋白质的测定方法的解答，让我们一起看看吧。

测定蛋白质分子量的常用方法？

如果你手上有比较大量的纯度比较高的蛋白质的话。可以尝试用以下比较直接的方法：

1. isothermal titration calorimetry （ITC），直接测定两个蛋白互相作用的Kd值。

2. AUC，也就是超速离心分析。可以直接测定两个蛋白相互作用与否。

3.SAXS, 也就是X-ray小角散乱。不过技术难度比较大一些。

4. 溶液NMR，这个应该可以但不太了解。

5. 结晶再解构，这个不用解释了。比较究极一点。

6.cryo-EM，同上。比较究级的方法。

7. 最简单常用的，gel-filtration，观察有没有oligomer的分子量峰出现。但是相互作用弱的话很难观测到。

8.更简单常用的nativePAGE，同上，相互作用弱则很难观测到。

9.用氨基架桥试剂共价连接，然后SDS-PAGE。看看有没有oligomer的带。暂时想到这些，跨度比较大。

血红蛋白测定的方法？

最常用的测定方法，就是比色法，这种方法是通过血细胞分析仪，然后可以自动的分析出血红蛋白的浓度。如果血红蛋白含量低于正常范围，就是有贫血到情况存在。如果出现了血红蛋白含量较低的情况，最好是在医生的指导下进行针对性治疗，积极配合，平常要好好休息，注意生活和饮食上的习惯

检测基因是否表达成功的方法？

主要用探针检测mRNA或用抗体检测出表达的蛋白质(转录水平上对特异mRNA的检测和翻译水平上对特异蛋白质的检测)

详见下面:

外源基因转录水平的鉴定

基因表达分为转录及翻译两阶段，转录是以DNA（基因）为模板生成mRNA的过程，翻译是以mRNA为模板生成蛋白质的过程，检测外源基因的表达就是检测特异mRNA及特异蛋白质的生成。所以基因表达检测分为两个水平：即转录水平上对特异mRNA的检测和翻译水平上对特异蛋白质的检测。转录水平上的检测主要方法是Northern杂交，它是以DNA或RNA为探针，检测RNA链。和Southern杂交相同，Northern杂交包括斑点杂交和印迹杂交。

也可用RT-PCR（reverse transcribed PCR）方法检测外源DNA在植物体内的转录表达。其原理是以植物总RNA或mRNA为模板进行反转录，然后再经PCR扩增。如果从细胞总RNA提取物中得到特异的cDNA扩增条带，则表明外源基因实现了转录。此法简单、快速，但对外源基因转录的最后决定，还需与Northern杂交的实验结果结合。

外源基因表达蛋白的检测

表达蛋白的检测方法有三种：①生化反应检测法：主要通过酶反应来检测；②免疫学检测法：通过目的蛋白（抗原）与其抗体的特异性结合进行检测，具体方法有Western杂交、酶联免疫吸附法（ELISA）及免疫沉淀法；③生物学活性的检测。

Western杂交是将聚丙烯酰胺凝胶（SDS-PAGE）电泳分离抗原（Antigen）固定在固体支持物上（如硝酸纤维素膜，NC膜）。不同分子量大小的蛋白质在凝胶中迁移率不同，据此可确定特定的抗原存在与否以及相对丰度，或者蛋白质是否遭到降解等。蛋白质电泳后转到NC膜，放在蛋白质（如牛血清蛋白BSA）或奶粉溶液中，温育，以封闭非特异性位点，然后用含有放射性标记或酶标记的特定抗体杂交，抗原-抗体结合，再通过放射性自显影或显色观察。

到此，以上就是小编对于蛋白质的测定方法的问题就介绍到这了，希望介绍关于蛋白质的测定方法的3点解答对大家有用。